肉的宰后嫩化一般归因于肌原玻纤空间设备构造的损毁，肌原玻纤空间设备构造是由内源性蛋清电离酶化学光降解肌原玻纤和細胞骨架蛋清从而造成的。与两百多年来一种是加关注核心的钙蛋清酶不一样的，胱天蛋清酶（caspases）近期作为感的兴趣话语题。胱天蛋清酶在細胞凋亡的履行时间段起着至关决定性的专业能力，之中caspase-3在死了蛋清电离中的专业能力是甲乙双问题和冗杂的，这样值得买进1步研发。S-亚硝基化按照自动转换钙脱离、势能排泄、蛋清质化学光降解和細胞凋亡来自动转换肉嫩，还包括嫩度和持水专业能力。之前研发发觉S-亚硝基化会降低依懒线粒体的caspase-3级联化学反应，这很有可能是身体肌肉細胞凋亡和牛肉片品格波动的缘由。caspase-3的研发核心是其与細胞凋亡的社会关系，既使，特少有研发一起探讨S-亚硝基化自动转换caspase-3的长效机制。

2024年9月由沈阳农林牧大学专业张万刚讲师管理团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生态学为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文题头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202几年决定因素：5.7

先生发表周期：2024年9月

企业客户企事业单位：南京农业大学

探究村料：蛋白

拜谱作为技能：亚硝基化修饰组学

技术性路经：

一、分析毕竟

01.Caspase-3可溶性

现如今尚不很清楚NO对caspase-3的仰拍摄用会不归因于NO介导的S-亚硝基化，与众不同溶度系数的GSNO当做外源性NO产生，以诱惑caspase-3的身体S-亚硝基化。最终结果反映出，与不存在GSNO的组对比，100、200和400μM GSNO组的caspase-3渗透性更为明显削减（图1），与事先有关资料不同。GSNO工作削减caspase-3渗透性的暗藏愿意仍迫切需要阐述。

图1 有所差异含量的GSNO治理 对caspase-3渗透性的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化成度

分析Caspase-3的亚硝基化因素，以体现了GSNO对Caspase-3的症状性。经GSNO办理后，检侧到caspase-3蛋白质S-亚硝基化比强度提高（图2）。这部分的结果反映，外源性GSNO培养教育可成就 促进caspase-3的身体外S-亚硝基化。最让人目瞪口呆的是，在不GSNO有的比较组中检侧到的变弱的S-亚硝基化带，这反映caspase-3可能会發生内源性的S-亚硝基化。还有，本分析中caspase-3的S-亚硝基化因素较高，而caspase-3的渗透性减低，这与事先的分析相符。其实，caspase-3的特异形S-亚硝基化遮盖位点尚不看清楚，还需要进一大步的探求。

图2 GSNO治理 对caspase-3S-亚硝基化的水平的会影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文编码序列。蓝色标上的回文编码序列表达出来S-亚硝基化肽，蓝色标上的C表达出来S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结蛋白酶

结核血清看作属于至关重要性的血细胞核骨架核血清，在形成肌血细胞核结构类型特征的结构类型特征详细的性和收敛性地方起侧重于要性效应，研究分析S-亚硝基化caspase-3对结核血清可溶解的灵敏性享有至关重要性必要性。与Std（未用胱天核血清酶-3和GSNO孵育的初始状态肌化学纤维板核血清）组差距，0 μM GSNO组（肌原化学纤维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的详细的结核血清含碳量正相关消减，温馨提示caspase-3对结核血清享有内在的的核血清淀粉水解特性。在GSNO孵育后，详细的结核血清的含碳量分明不断增加（P < 0.05）。凡此种种，当GSNO溶度提高时，详细的结核血清的含碳量持续性上涨（P < 0.05）（图5）。上述显示显示，SNO体现的caspase-3以质量依懒的手段限制结核血清的可溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3挥发结球蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙球蛋白-T

肌钙核球淀粉酶酶酶质-T (TnT)是原肌球核球淀粉酶酶酶质调责任身体肌肉伸缩的丝条的必不可少肌原钎维核球淀粉酶酶酶质。TnT的光分解有特点是判断工具到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化必要条件下，caspase-3对TnT的光分解现象图甲中6图甲中，与Std组（富含caspase-3和GSNO的肌原钎维）相较，caspase-3组中30 kDa TnT片断相关性增强，证明caspase-3参于了TnT的光分解，然而，caspase-3与GSNO的孵育引起30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组直接无判断工具到很深的地域差异(P > 0.05)，而当GSNO的浓硫酸浓度到400 μM 时，该片断相关性缩减(P < 0.05)。以上发现证明了SNO装饰语的caspase-3对TnT光分解的抑制性效果。结核球淀粉酶酶酶质和TnT是caspase-3的敏感脆弱底物，而GSNO除理变低caspase-3的抗逆性酶概率引起肌原钎维核球淀粉酶酶酶质光分解的程度变低。上述情况所论，NO成脂的S-亚硝基化能经过装饰语半胱氨酸残基来调caspase-3的抗逆性酶，接着进步骤反应其对结核球淀粉酶酶酶质和TnT的核球淀粉酶酶酶质水解反应水平，因而反应羊肉品格。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本深入分析契机初探S-亚硝基化对caspase-3突显的影晌还有其随着对牛羊肉肌原合成纤维棉身体外挥发的影晌。核核球蛋白S-亚硝基化还可以突显caspase-3的半胱氨酸残基，因此产生caspase-3催化活性调低，进三步调控了其对牛羊肉肌原合成纤维棉核核球蛋白的核核球蛋白水解反应特性。

三、拜谱总结

的实验使用了酶活测试，亚硝基化修饰语语组学讲解，WB等查测具体方法，找到蛋清质S-亚硝基化能能修饰语语caspase-3的半胱氨酸残基，这产生了caspase-3特异性的下降，相结一点遏制了其对牛羊肉肌原纤维棉蛋清质的蛋清质水解反应的能力。本的实验为说明蛋清质质亚硝基化对肉肥的房产调控管理机制给出一个新的视觉。

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选取论文文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663